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COVID-19檢測小貼士
為了支持新型冠狀病毒（COVID-19）的檢測及疫苗研發(fā)工作，美國疾病預(yù)防控制中心（CDC）和中國政府都已完成了新型冠狀病毒基因組的測序并將結(jié)果提交至US NCBI GenBank®數(shù)據(jù)庫 [1]。近日，IDT收到了來自世界各地研究人員關(guān)于新型冠狀病毒檢測試劑盒的詢問，以下是部分簡要說明。
美國疾病預(yù)防控制中心
美國疾病預(yù)防控制中心檢測試劑盒* 靶向COVID-19核衣殼蛋白基因（N-基因）上的不同位點。該試劑盒中的3組引物/探針必須與靶向人RNase P基因的內(nèi)部對照同時運行。每個患者樣本共需進(jìn)行4次qPCR檢測。
1.該檢測試劑盒采用一步法qPCR反應(yīng)（即逆轉(zhuǎn)錄和后續(xù)qPCR反應(yīng)在同一步驟中完成）；
2.所有3次N-基因檢測只有在Cq <35時方可視為陽性結(jié)果；
3.RNase P內(nèi)部對照反應(yīng)是關(guān)鍵。Cq >35表示樣本提取不佳，需要重復(fù)實驗；
敬請查閱最新的美國疾病預(yù)防控制中心 COVID-19 RT-PCR檢測方法實驗室指南，獲取相關(guān)文檔及實驗方案。
與其他檢測試劑盒的比較
世界衛(wèi)生組織（WHO）
世界衛(wèi)生組織實驗方案不同于美國疾病預(yù)防控制中心實驗方案。世界衛(wèi)生組織建議需進(jìn)行3次qPCR反應(yīng)來確認(rèn)是否感染COVID-19。盡管這是一套完整的實驗方案，但沒有美國疾病預(yù)防控制中心檢測方法來得快，因為它需要連續(xù)進(jìn)行3次檢測，且必須觀察到陽性結(jié)果才能進(jìn)行下一次檢測。該實驗方案按如下順序進(jìn)行檢測：
1.冠狀病毒E-基因
2.RdRP基因：針對SARS 冠狀病毒和其他蝙蝠相關(guān)冠狀病毒
3.RdRP基因：針對COVID-19
中國疾病預(yù)防控制中心
中國疾病預(yù)防控制中心檢測試劑盒建議采用2組引物/探針。第1組靶向ORF 1ab，第2組用于確認(rèn)COVID-19的N-基因。
對照組
初步的電子模擬分析表明，搭配使用 IDT N-基因陽性對照組模板**與美國疾病預(yù)防控制中心檢測試劑盒，與使用中國疾病預(yù)防控制中心、泰國衛(wèi)生部以及HKU的引物/探針組進(jìn)行類似實驗獲得的結(jié)果相符。當(dāng)然，這是基于電子模擬研究，建議用戶在自己的實驗室中對所選試劑盒進(jìn)行驗證。
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